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利用斑马鱼评价供试品舒缓功效

【实验原理】

暴露于生活环境中的皮肤,接触到有毒有害物质后可能引起一定程度的皮肤炎症,出现皮肤红肿、瘙痒等现象。一些医美类化妆品除具有常规护肤功效外还能起到舒缓作用。通过斑马鱼技术能有效评价供试品舒缓功效。

1、化妆品对皮肤的刺激表型主要表现为皮肤炎症,炎症早期主要表现为毛细血管扩张、通透性亢进和水肿。十二烷基磺酸钠(SLS)是人体皮肤刺激物模型斑贴试验常见的阳性对照物,SLS刺激后能诱发表皮炎症细胞浸润,刺激物进入斑马鱼体内,诱导炎症反应,中性粒细胞发生免疫应答,向皮肤表皮迁移并聚集。

2、TNF-α在机体受到刺激时会大量产生,主要来自于活化的巨噬细胞、自然杀伤细胞和T淋巴细胞;IL-6 能够促进中性粒细胞功能上调,促进和调节细胞因子、黏附分子以及一氧化氮等炎症介质分泌;IL-8 由单核细胞和血管内皮细胞分泌生成,炎症发生时其水平迅速升高。IL-1 在炎症反应中传递信息、激活以及调节免疫细胞、增殖与分化炎症其关键作用。若供试品具有能够降低TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8 等炎症因子水平的作用,则说明其具有舒缓的功效。

3、肥大细胞是类过敏反应的主要效应细胞,激活的肥大细胞数量与过敏程度相关,激活的肥大细胞越多,过敏程度越严重。类胰蛋白酶(Tryptase )是肥大细胞内预先合成的中性蛋白酶,是含量最多的介质,在肥大细胞中的储存和表达有高度的选择性。肥大细胞脱颗粒后,类胰蛋白酶会转化成具有活性的构象并被释放到细胞外,Tryptase可作为肥大细胞脱颗粒的标志。

4、斑马鱼受到疼痛时会产生运动轨迹上的变化。通过测定斑马鱼运动轨迹作为伤害性感受阈的测量指标。

【实验方法】

将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和供试品组。正常对照组不做处理,模型对照组仅用SLS处理,供试品组在用SLS的同时添加受试化妆品。孵育一段时间后:

1、将斑马鱼整体放到荧光显微镜下拍照,统计皮肤表面中性粒细胞数量

2、利用Q-PCR检测IL-6等基因相对表达量

3、利用酶标仪检测各组吸光度值(OD值),以OD值分析类胰蛋白酶含量、过敏程度

4、利用斑马鱼行为分析仪检测斑马鱼的运动距离,定量评价供试品的神经舒缓的效果

【评价指标】

1、皮肤中性粒细胞数量

2、炎症因子IL-1α、IL-6、IL-8、TNFα分泌量

3、过敏反应标志物(类胰蛋白酶)含量

4、神经舒缓-总运动距离

【结果展示】

(*展示图片仅供参考,实际实验组别依据合同而定)

1、皮肤中性粒细胞数量

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图1.皮肤中性粒细胞表型图 

黄色虚线区域为计算区域,绿色荧光点为中性粒细胞

2、炎症因子表达水平:提供柱状图

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图2.斑马鱼IL-6基因相对表达量

3、类胰蛋白酶含量:提供柱状图

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图3.类胰蛋白含量柱形图 

4、神经舒缓(镇痛)-总运动距离(轨迹图、柱状图,略)

12.png

图4.斑马鱼运动轨迹图 

【评价结论】

供试品斑马鱼中性粒细胞数量、炎症因子表达量、类胰蛋白酶的量与模型对照组相比,明显减少;斑马鱼运动距离与模型对照组相比,明显减少;本实验证明该供试品具有舒缓功效。


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