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利用细胞评价供试品控油功效

【评价原理】

皮脂腺是雄激素的来源和目标组织,皮脂腺中产生脱氢表雄酮,经过一系列的酶催化转化为最活跃的睾酮和5α-双氢睾酮,它们能够刺激皮脂腺细胞的增殖分化(未分化的幼稚细胞首先进行增殖,部分子细胞形成脂滴,并向腺胞中心移动,逐渐发育分化为能储积并分泌脂质的成熟的皮脂腺细胞),也能刺激脂质的合成。本实验通过睾酮诱导脂质合成,通过尼罗红染色法来检测皮脂腺细胞脂质的积累,从而判断供试品是否具有控油功效。

【实验方法】

收集生长状态良好的SZ95细胞,经胰酶消化离心后,用DMEM 完全培养基重悬细胞并调整细胞浓度为1×10^5 个/mL,在6 孔板加入无菌的细胞爬片,每孔均匀接种2 mL细胞悬液,随后将其放置在37℃,5%CO2 培养箱中孵育。待细胞贴壁后,空白组和模型组更换为新鲜培养基,受试物组更换为含受试物的新鲜培养基,用睾酮处理以诱导脂质合成。随后将其放置在37℃,5%CO2培养箱中继续孵育24 h。待孵育24 h后,弃去培养基,用PBS 洗涤2次,室温下4%多聚甲醛固定10 min。固定后,用尼罗红染液(100 μg / mL)染色,并在37℃培养箱中孵育10 min,吸去染液,随后用PBS 清洗3 ~ 5 次,轻轻取出细胞爬片将其放置于载玻片上,并均匀滴加10μL 抗荧光猝灭封片剂。荧光显微镜下观察染色情况,具有强橙红色荧光的细胞是富含脂质的阳性细胞。尼罗红染色检测SZ95细胞质内脂质积累。

【评价指标】SZ95 细胞质内脂质积累

【结果展示】(展示图片仅供参考,实际实验组别依据合同而定)

1.jpg

图1 细胞内脂质积累表型图

【评价结论】

供试品组细胞内脂质含量与模型对照组相比减少,初步证明供试品具有控油功效。

【参考文献】

[1]刘武阳.黄连活性成分分离及抑制人皮脂腺细胞雄性激素合成机制研究[D].西南大学2020

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